Количественный ПЦР

Запрос «RT-PCR» перенаправляется сюда. Если вас интересует ПЦР в реальном времени (Real-time PCR), или количественная ПЦР (quantitative PCR), см. ПЦР в реальном времени.

В молекулярной биологии reverse transcription polymerase chain reaction сокращают как RT-PCR; ПЦР с применением обратной транскрипции, соответственно, как ОТ-ПЦР. Это метод амплификации специфического фрагмента рибонуклеиновой кислоты (РНК).

Одноцепочечную молекулу РНК превращают в реакции обратной транскрипции (ОТ, RT, reverse transcription) в комплементарную ДНК (cDNA) и далее амплифицируют уже одноцепочечную молекулу ДНК, используя традиционную ПЦР. RT-PCR (ОТ-ПЦР) не следует путать с Real-time ПЦР (Q-PCR), которую также иногда неверно сокращают как RT-PCR.

Описание метода

Для превращения последовательности РНК в комплементарную ДНК используют обратную транскриптазу:

1. Реакция первой цепочки:

Комплементарная ДНК (cDNA) образуется на матрице мРНК из dNTP ферментом обратной транскриптазой. Компоненты реакции смешиваются с ДНК-праймером и буфером с обратной транскриптазой на один час при 37°C.

2. Реакция второй цепочки:

После того как обратная транскрипция закончена и образована cDNA на матрице мРНК, следующие циклы производятся по стандартной методике ПЦР.

После около 30 циклов амплификации образуются миллионы копий нужной последовательности.

Использование ОТ-ПЦР

RT-PCR обычно используется при изучении ВИЧ, так как ВИЧ является ретровирусом и поэтому использует фермент обратную транскриптазу ВИЧ (HIV-Reverse Transcriptase) для синтеза вирусной ДНК, которая затем встраивается в геном хозяина.

Экспоненциальная амплификация при помощи ОТ-ПЦР является чувствительной методикой, с помощью которой может быть обнаружено малое количество молекул РНК. ОТ-ПЦР широко используется для диагностики генетических заболеваний и полуколичественного определения специфических молекул РНК в клетке или ткани как индикатор экспрессии соответствующих генов.

См. также

• ПЦР
• Real-time PCR