- X-gal
-
5-бромо-4-хлоро-3-индоил-бета-D-галактопиранозид 
Общие Систематическое наименование 5-бромо-4-хлоро-3-индоил-бета-D-галактопиранозид Химическая формула C14H15BrClNO6 Физические свойства Молярная масса 408,629 г/моль Термические свойства Классификация Рег. номер CAS 7240-90-6 SMILES C1=CC(=C(C2=C1NC=C2O[C@H]3[C@@H]([C@H]([C@H]([C@H](O3)CO)O)O)O)Cl)Br X-gal (также BCIG от англ. bromo-chloro-indolyl-galactopyranoside) — органическое соединение, состоящее из галактозы, соединенной с индолом. Очень широко используется в качестве субстрата для бета-галактозидаз в генетической инженерии и молекулярной биологии.
Содержание
Применение
Клонирование
X-gal используют при клонировании генов для экспрессии в клетке гена фермента β-галактозидазы, закодированного в гене lacZ.
X-gal расщепляется β-галактозидазами, при этом образуется галактоза и 5-бромо-4-хлоро-3-гидроксииндол. Последний окисляется в 5,5'-дибромо-4,4'-дихлоро-индиго, нерастворимый окрашенный продукт. В чашку Петри или культуральный флакон вносят X-gal совместно с индуктором β-галактозидаз, например, IPTG.
X-gal позволяет визуально определить, какие из колоний E. coli трансформированы нужным вектором. В норме в клетках E. coli фермент, закодированный геном lacZ синтезируется под действием индуктора IPTG, а синее окрашивание теряется у клеток, содержащих генно-инженерную конструкцию, в которой ген lacZ нарушен в результате генетической вставки.
Репортер
Ген lacZ может быть использован в качестве репортерного, при выращивания бактерии или дрожжей на среде, содержащей X-gal. В случае, когда промотор гена-мишени связан с кодирующей частью гена галактозидазы, связывание белка-активатора с промотором, приводит к образованию окрашенного продукта расщепления X-gal.[1]
Исследование воды
X-Gal используют для определения E. coli и родственных бактерий в образцах воды.
Примечания
- ↑ Joung J, Ramm E, Pabo C (2000). «A bacterial two-hybrid selection system for studying protein-DNA and protein-protein interactions». Proc Natl Acad Sci USA 97 (13): 7382–7. DOI:10.1073/pnas.110149297. PMID 10852947.
Категория:- Методы молекулярной биологии
Wikimedia Foundation. 2010.
