Фиксация в микроскопии

Фиксация - обработка образца, предназначенного для микроскопирования, с целью сохранить, насколько это возможно, их структуры в неизменном состоянии^[1]. В противном случае под действием собственных ферментов, действия гнилостных организмов и в силу других причин образец становится непригодным для исследования. Применяется в гистологии и микробиологии, патологической анатомии. Наиболее распространены химические методы фиксации; в микробиологии часто применяется фиксация нагреванием.

Фиксация образца предшествует его окраске, за исключением витального окрашивания. В гистологии фиксация является этапом, следующим сразу за получением образца.

Общие требования к фиксаторам

• Фиксаторы должны работать быстро.
• Не должны вызывать деформацию тканей или делать их хрупкими.
• Должны переводить клеточное содержимое в состояние, нерастворимое в воде и других жидкостях, использующихся при дальнейшей обработке препарата.
• Не вызывает затемнение препарата, а, напротив, способствует его просветлению.
• Не образует в клетках артефактов фиксации.
• Не препятствует окраске препарата выбранным методом. Это особенно актуально при использовании иммуногистохимических методов окраски; к примеру, при использовании обычного формалина антигенные структуры зачастую выявить не удается, в таких случаях рекомендуется использовать забуференный (нейтральный) формалин.

Типы фиксаторов

Универсальных фиксаторов, одинаково пригодных для любых целей, не существует. Выбор фиксирующего раствора основывается на его преимуществах и недостатках для работы с конкретным видом материала и пригодностью для конкретного метода микроскопического исследования.

Формалиновые

Наиболее распространенный тип фиксирующего раствора. Прост, дешев, относительно малоопасен для работающего. Используются водные растворы формальдегида в чистом виде, и в составе смесей с другими веществами, например, с уксусной кислотой. Недостаток формалиновых фиксаторов - излишнее уплотнение тканей^[2]. Кроме того, при использовании чистого формалина зачастую возможно выпадение белого осадка (кристаллы муравьиной кислоты). Поэтому чаще используют "забуференный" нейтральный формалин.

Спиртовые

Чистый этиловый спирт используют в редких случаях, так как он может вызывать сморщивание материала.

• Смесь Шаффера — составляется из 2 частей 80% этилового спирта и 1 части формалина. Продолжительность фиксации 1 — 2 дня.
• Смесь Карнуа — из 6 частей абсолютного этилового спирта, 3 частей хлороформа и 1 части уксусной кислоты. Готовится непосредственно перед употреблением. Продолжительность фиксации 1/2 — 3 часа. Смесь пригодна для фиксации объектов, имеющих плотные оболочки (насекомые, круглые черви).
• Жидкость Дитриха - смесь этилового спирта, формалина, уксусной кислоты и воды. Продолжительность фиксации 8 - 24 часа. Пригодна для членистоногих^[3].

На основе пикриновой кислоты

Объекты, зафиксированные смесями на основе пикриновой кислоты, неустойчивы в воде, поэтому после фиксации объект переносят в 70% спирт. После фиксации объект приобретает желтую окраску, что обычно не мешает работе.

• Смесь пикриновой и уксусной кислот. Насыщенный растовр пикриновой кислоты в 10% уксусной. Пригодна для мелких и нежных объектов.
• Смесь Буэна. 15 частей насыщенного водного раствора пикриновой кислоты, 5 частей формалина, 1 часть уксусной кислоты. Продолжительность фиксации 2 часа. Затем объекты могут длительное время не портясь сохраняться непосредственно в растворе фиксатора^[3].

Сулемовые

Осторожно! Яд! Портит металлические предметы.

Фиксирующие смеси на основе сулемы работают медленно. Применяются в гистологии. Хорошие ядерные фиксаторы ^[4].

Осмиевая кислота

Осторожно! Яд!

Фиксаторы на основе осмиевой кислоты мало изменяют структуру тканей и клеток. Хорошие ядерные фиксаторы. Окрашивают жиры в тёмный цвет ^[5]. В электронной микроскопии применяется в качестве контрастного вещества. Чрезвычайная ядовитость и высокая цена ограничивают применение осмиевых фиксаторов.

Сноски

1. ↑ Роскин, 1946, с. 81
2. ↑ Роскин, 1946, с. 88-89
3. ↑ ^{1 2} Роскин, 1946, с. 91
4. ↑ Роскин, 1946, с. 93
5. ↑ Роскин, 1946, с. 95

Литература

• Роскин Г. И. Микроскопическая техника. — М.: Государственное издательство «Советская Наука», 1946.