Фотообесцвечивание

 

Фильм демонстритрует фотообесцвечивание флюорофора. Видеозапись ускорена, процесс от начала до конца занял примерно 4 минуты

Фотообесцвечивание (фотовыцветание, обесцвечивание светом) — фотохимическое разрушение флюорофора. В микроскопии фотообесцвечивание может усложнять наблюдение за флюоресцентными молекулами, так как последние со временем разрушаются при облучении светом, вызывающим флюоресценцию.

Фотообесцвечивание может быть использовано до применения флюорофоров, связанных с антителами, для гашению аутофлуоресценции, что позволяет понизить фоновый уровень сигнала.

Обесцвечивание светом может быть использовано для изучения движения или диффузии молекул, например, при помощи (англ. FRAP, Fluorescence recovery after photobleaching) или (англ. FLIP, Fluorescence loss in photobleaching).

Снижение эффекта фотообесцвечивания можно регулировать снижением интенсивности или промежутка времени облучения светом, повышением концентрации флюорофора, снижением частоты (и энергии протона) поглощаемого света, либо применением более устойчивых к разрушению флуорофоров, например, Alexa или DyLight Fluor.

Продолжительность

В зависимости от вещеста, красители могут образовывать разное число протонов и поэтому имеют различный период полураспада:

• Зеленый флуоресцентный белок (англ. GFP): 10⁴−10⁵; 0,1-1 c
• Обычный органический краситель: 10⁵−10⁶; 1-10 с
• CdSe/ZnS: 10⁸; > 1000 минут

Ссылки

• Введение в оптическую микроскопию. Статья о фотообесцвечивании (на английском языке)
• Viegas MS, Martins TC, Seco F, do Carmo A (2007). «An improved and cost-effective methodology for the reduction of autofluorescence in direct immunofluorescence studies on formalin-fixed paraffin-embedded tissues». Eur J Histochem 51 (1): 59–66. PMID 17548270.