АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ


АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

(от лат. affinis - родственный) (биоспецифич. хроматография, хроматография по сродству), метод очистки и разделения белков, основанный на их избират. взаимод. с лигандом, ковалентно связанным с инертным носителем. В кач-ве лигандов используют соед., взаимод. к-рых с разделяемыми в-вами основано на биол. ф-ции последних. Так, при разделении ферментов (для чего преим. и применяется А. х.) лигандами служат их субстраты, ингибиторы или коферменты. Главная особенность, к-рая обусловливает высокую эффективность А. х., состоит в том, что разделение основано на различии не физ.-хим. признаков молекулы (заряда, формы и размера), а специфич. функциональных св-в, отличающих данный фермент от множества др. биополимеров.

Неподвижная фаза в А. х. представляет собой специально получаемый сорбент, построенный обычно по схеме: носитель - соединяющее звено ("ножка") - специфич. лиганд. Носителем служит чаще всего сефарозапроизводное агарозы, имеющее поперечные сшивки. Присоединение к ней лиганда или "ножки", содержащих, как правило, аминогруппу, осуществляется после активации сефарозы бромцианом:
1042-16.jpg

Содержание лиганда колеблется от 0,1 до 10 мкмоль на 1 г влажного сорбента. Сефароза, однако, малоустойчива к действию ряда хим. в-в и микроорганизмов.

Более стабильны макропористые неорг. носители (кремнезем, стекло) и орг. полимеры. Если лиганд присоединяется непосредственно к носителю, эффективность специфич. взаимод. с ферментом заметно снижается вследствие пространств. затруднений. "Ножка", как правило, устраняет стерич. препятствия, отдаляя лиганд от носителя. Как и носитель, она должна быть инертной и не влиять на процессы в ходе А. х., чего, однако, не всегда удается достигнуть. Напр., присоединение "ножки" по приведенной выше р-ции приводит к образованию катионной группировки изомочевины, и сорбент приобретает св-ва анионита. В кач-ве "ножки" используют обычно ди- и полиамины,1042-17.jpgаминокислоты, пептиды, олигосахариды.

Лигандами могут служить субстраты (напр., крахмал или гликоген при разделении амилаз), однако их превращ. в ходе А. х., катализируемое разделяемым ферментом, постоянно изменяет св-ва сорбента. Поэтому, как правило, применяют аналоги субстратов, устойчивые к дальнейшему превращ., т. е. ингибиторы ферментов. Так, для выделения протеиназ используют не расщепляемые ими пептиды D-аминокислот. Эффективны прир. ингибиторы ферментов, напр. пепстатин - ингибитор аспартильных протеиназ. Иногда применяют лиганды, связывающие большие группы родственных ферментов (в частности, киназы и дегидрогеназы). Примеры таких "группоспецифич." лигандов-антрахиноновые красители, аналоги никотинамидадениндину-клеотида.

Известны лиганды (напр., производные фенилборной к-ты), имитирующие при взаимод. с ферментом структуру переходного комплекса с субстратом. Такие лиганды эффективны при выделении сериновых гидролаз.

Разделение в А. х. обычно проводят на хроматографич. колонках; иногда разделяемую смесь помещают в сосуд с сорбентом и выдерживают до полного связывания исследуемого компонента. Затем сорбент (в колонке или сосуде) промывают буферным р-ром для удаления несвязавшихся в-в, после чего десорбируют исследуемый компонент. Десорбция (элюция) последнего обычно достигается повышением ионной силы, изменением рН буферного р-ра или добавлением в него орг. р-рителя, что ослабляет взаимод. лиганд - фермент. Более избирательна десорбция р-ром лиганда.

Помимо ферментов, методом А. х. можно выделять также токсины, рецепторы, ингибиторы, транспортные белки и др. биологически активные в-ва. Высокой избирательностью отличается т. наз. иммуносорбция, при к-рой в кач-ве лиганда используют антитела, обладающие специфичностью к выделяемым белкам; особенно эффективны моноклональные антитела.

Для разделения белков применяется также ряд др. аналогичных методов. Т. наз. ковалентная хроматография основана на избират. образовании и последующем расщеплении ковалентных связей между выделяемым в-вом и носителем, напр. между белком с SH-группами и ртуть-орг. производными агарозы. Применяется также лигандообменная хроматография, при к-рой ферменты связываются через функциональный ион металла с комплексоном, иммобилизованным на носителе. Получила распространение гидрофобная хроматография, при к-рой сорбент (напр., фенилсефароза), содержащий гидрофобные группировки, вкрапленные в гидрофильную матрицу, взаимодействует с гидрофобными участками, содержащимися на пов-сти белков. Нередко при этом наблюдаются также ионообменные взаимод., как, напр., при использовании в качестве сорбента алкиламиносефароз.

Избират. выделение гликопротеинов обеспечивают иммобилизованные на носителях лектины - белки, специфически взаимодействующие с концевыми моносахаридными звеньями углеводных цепей. Иммобилизованные субъединицы ряда белков с четвертичной структурой м. б. использованы для извлечения этих белков из сложных смесей вследствие специфич. межсубъединичных контактов. А. х. сформировалась как метод в кон. 60-х гг. 20 в.

Лит.: Туркова Я.. Аффинная хроматография, пер. с англ.. М., 1980. В. М. Степанов.


Химическая энциклопедия. — М.: Советская энциклопедия. . 1988.

Смотреть что такое "АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ" в других словарях:

  • Аффинная хроматография — разновидность лигандной. В основе последней лежит реакция взаимодействия разделяемых примесей с лигандом, связанным с инертным носителем. В случае аффинной хроматографии в роли примесей выступают биологически активные вещества (белки, ферменты),… …   Википедия

  • аффинная хроматография — Хроматография для очистки антигена с помощью сорбента содержащего специфичные антитела [http://www.dunwoodypress.com/148/PDF/Biotech Eng Rus.pdf] Тематики биотехнологии EN antibody affinity chromatography …   Справочник технического переводчика

  • Аффинная хроматография — * афінная храматаграфія * affinity chromatography хроматографический метод разделения молекул (см. ) белков или ДНК на основе их специфической аффинности, т. е. сродства, к лигандам (см.), связанным с нерастворимым матриксом (см.). Напр.,… …   Генетика. Энциклопедический словарь

  • аффинная хроматография — giminiškumo chromatografija statusas T sritis Standartizacija ir metrologija apibrėžtis Chromatografija, pagrįsta biologiškai aktyvių medžiagų sąveika su gėriklio ligandais. atitikmenys: angl. affinity chromatography; biospecific affinity… …   Penkiakalbis aiškinamasis metrologijos terminų žodynas

  • АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ — жидкостная хроматография, основанная на биоспецифич. взаимодействии биологически активных в в с лигандами, к рые химически связаны с инертным носителем. Применяется для разделения белков и др. природных соед., в т.ч. ферментов, токсинов, антител …   Естествознание. Энциклопедический словарь

  • ДНК-аффинная хроматография — * ДНКафінная храматаграфія * DNA affinity chromatography хроматографический метод изолирования и очистки ДНК связывающих белков, однонитчатых ДНК или РНК на основе их специфического сродства к ДНК, связанной с нерастворимым матриксом (см.) …   Генетика. Энциклопедический словарь

  • хроматография по сродству — аффинная хроматография — [http://www.dunwoodypress.com/148/PDF/Biotech Eng Rus.pdf] Тематики биотехнологии Синонимы аффинная хроматография EN affinity chromatography …   Справочник технического переводчика

  • Хроматография — (от др. греч …   Википедия

  • хроматография по сродству — giminiškumo chromatografija statusas T sritis Standartizacija ir metrologija apibrėžtis Chromatografija, pagrįsta biologiškai aktyvių medžiagų sąveika su gėriklio ligandais. atitikmenys: angl. affinity chromatography; biospecific affinity… …   Penkiakalbis aiškinamasis metrologijos terminų žodynas

  • Хроматография — * храматаграфія * chrоmаtography физико химический способ разделения смесей, который заключается в сорбции компонентов смеси твердым носителем и последовательном вымывании их. Существует несколько методов Х.: адсорбционная, аффинная, бумажная,… …   Генетика. Энциклопедический словарь


Поделиться ссылкой на выделенное

Прямая ссылка:
Нажмите правой клавишей мыши и выберите «Копировать ссылку»

We are using cookies for the best presentation of our site. Continuing to use this site, you agree with this.