Бактерицидная активность сыворотки крови

Бактерицидная активность сыворотки крови

(БАС) - св-во свежей с-ки крови вызывать гибель проникших или внесенных в нее бактерий. Обусловливается раздельным или совокупным действием Ат, С, лизоцима, b-лизина и др. менее идентифицированных факторов. Изучение соотносительного значения перечисленных факторов показало, что инактивация С существенным образом снижает БАС, добавление Ат резко повышает ее, отсутствие лизоцима и   (3-лизина приводит к более или менее выраженному снижению БАС в зависимости от чувствительности к ним бактерий. Механизм кооперативного действия представляется так: система Ат -С разрушает и клеточную стенку,и цитоплазматическую мембрану; лизоцим -пептидогликан клеточной стенки; р-лизин - цитоплазматическую мембрану. Уровень БАС является интегральным показателем антимикробных св-в с-ки крови. Падение его указывает на глубокие нарушения в иммунитете и служит неблагоприятным прогностическим признаком, повышение уровня БАС оценивается положительно. При существующих методах определения БАС в качестве объекта обычно используют не возбудителя 6-ни, а штаммы кишечной палочки, относительно устойчивые к лизоциму. В результате они отражают главным образом уровень С и нормальных Ат против тест-микроба. Тем не менее БАС - самостоятельный показатель активности естественного иммунитета, т.к. прямой связи между БАС и активностью С нет. При практическом использовании также следует иметь в виду, что показатель БАС колеблется в зависимости от пола, возраста, времени года и др. факторов. Для определения БАС существуют две группы методик. Методики первой группы основаны на нефелометрическом установлении степени задержки роста стандартной бактер. суспензии под влиянием бактерицидных факторов иссл. с-ки по отношению к контролю, содержащему бактер. взвесь без с-ки. Среди этой группы чаще используют методику О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой (1966). Для ее выполнения берут 2 пробирки с 4,5 мл МПБ, в одну (опытную) добавляют каплю суточной бульонной к-ры кишечной палочки и 1 мл свежей нативной иссл. с-ки, в другую - каплю к-ры без с-ки. После перемешивания из обеих пробирок отливают по 2 мл взвеси и замеряют оптическую плотность (ДО, и ДК,) на ФЭК-Н с зеленым светофильтром №10. В контрольном кювете ФЭК должна быть дис-тил. вода. Пробирки с оставшейся смесью инкубируют при 37°С 3 ч и повторно замеряют оптическую плотность (ДО₂, ДК₂). БАС рассчитывают в процентах угнетения размножения к-ры по формуле: % БАС = 100 - (ДО₂- ДО₁)/(ДК₂- ДК₂) х 100. О.В.Бухарин и А.П.Луда (1972) предложили вариант описанной методики с расчетом показателей БАС при помощи таблиц и меньшего объема с-ки. Методика второй группы основана на установлении количества выживших бактерий после воздействия свежей иссл с-кой. В одном варианте определяют титр с-ки крови, задерживающий размножение стандартного количества бактерий, в другом - вычисляют отношение КОЕ контроля к КОЕ опыта и выражают его в виде десятичного логарифма, называемого бактерицидным индексом (БИ). В практике чаще используют второй вариант в методике Karolcek с соавт. (1959). Для установления БАС по этому способу в стерильные пробирки вносят по 0,4 мл неразведенных иссл. с-к крови и добавляют к ним 0,1 мл суточной бульонной к-ры штамма кишечной палочки № 675 плотностью 250 млн м.т./ мл. В контрольную пробирку вместо с-ки доливают 0,4 мл физраствора с 0,1% желатины. Пробирки выдерживают на водяной бане при 37°С 2 ч, после чего готовят разведения: из опытных пробирок - 10^-1  и 10^-2, из контрольной - 10^-1, 10^-2, 10^-3, 10^-4и 10^-5. Микропипеткой высевают по 0,1 мл на чашки с МПА из опытных пробирок цельную и разведенную в 10 и 100 раз смесь, из контроля -разведения 10^-3, 10^-4, 10^-5. К-ру распределяют по чашке с помощью стеклянных бус. Посевы инкубируют при 37°С сутки, после чего подсчитывают число КОЕ в 1 мл опытных и контрольных проб. БАС выражают либо бактерицидным индексом (БИ) -частное от логарифма количества бактерий в опыте(lg No) к количеству бактерий в контроле (lg Nk), либо в процентах по формуле: % БАС = 100 - No/Nk х 100. Между уровнем БАС и показателем БИ имеется прямая связь, между уровнем БАС и % БАС - обратная. В методике А.П.Красильникова и Л.П.Титова (1981) способы приготовления смеси с-ки и бактерий, разведении из смесей после их инкубации, время и условия инкубации аналогичны описанным выше. Высев проводится с помощью 50-штифтового штампа-репликатора, учет роста - по наиболее вероятному числу выживших бактерий (НВЧ). Для этого разведения смеси переливают в лунки основания штампа-репликатора, штыри крышки репликатора окунают в смесь, находящуюся в лунках, и делают посев-отпечаток на 5 чашек с МПА. После суточной инкубации при 37°С учитывают количество отпечатков с ростом тест-микроба для каждого разведения на всех 5 чашках и по таблицам Тейлора (1962) находят НВЧ бактерий, содержащихся в 0,003 мл (объем, засеваемый штифтом репликатора) наиболее концентрированной из взятых разведении смеси. Бактерицидный эффект выражают либо в БИ, либо в процентах активности (см. выше).

(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)