Коагуляционные пробы

(лат. coagulatio свертывание, сгущение; синоним: осадочные пробы, флоккуляционные пробы, пробы на лабильность сывороточных белков, диспротеинемические тесты)

полуколичественные и качественные пробы, предназначенные для определения коллоидной устойчивости белков сыворотки крови при различных патологических состояниях, сопровождающихся диспротеинемией.

Основным органом, в котором синтезируются белки сыворотки крови, является печень, поэтому нарушение функции клеток печеночной паренхимы всегда сказывается на структуре синтезируемых в них белков, В тех случаях, когда еще нельзя отметить изменений в величине альбумин-глобулинового коэффициента (Альбумин-глобулиновый коэффициент), т.е. на самых ранних стадиях развития патологических состояний, затрагивающих печень, с помощью К. п. выявляются нарушения коллоидной устойчивости сывороточных белков. Именно поэтому К. п. ранее называли печеночными пробами. Позже было установлено, что К. п. изменяются при различных заболеваниях, сопровождающихся диспротеинемией.

Устойчивость белкового коллоидного раствора к коагуляции (слипанию частиц с образованием их агрегатов) зависит от величины отдельных коллоидных частиц, их электрического заряда и толщины сольватного слоя, окружающего каждую частицу. Образование агрегатов и даже выпадение их в осадок происходит при увеличении размера коллоидных частиц, уменьшении их электрического заряда или разрыве сольватного слоя между частицами. При диспротеинемиях физико-химические характеристики коллоидного раствора, образуемого белками сыворотки крови, меняются и те факторы, которые раньше не могли вызвать его коагуляцию, приводят к слипанию частиц коллоидного раствора сывороточных белков с образованием более или менее крупных агрегатов. Диагностическая ценность К. п. возрастает при сопоставлении их результатов с результатами других проб и клинической картины заболевания.

В СССР в качестве унифицированных методов используются тимоловая, сулемовая пробы и проба Вельтманна.

Тимоловая проба (проба тимолового помутнения, тимоловая мутность) предложена в 1944 г. английским патологом Маск-Лаганом (N.F. Mac-Lagan). Она основана на определении степени помутнения сыворотки крови при ее взаимодействии с насыщенным раствором тимола в веронал-мединаловом буфере, рН 7,8. Интенсивность помутнения зависит от природы буферного раствора, величины рН, концентрации, степени чистоты используемого тимола и от температуры.

Проведение тимоловой пробы заключается в следующем: к 6 мл тимолово-вероналового буферного раствора прибавляют 0,1 мл негемолизированной сыворотки крови и после 30 мин стояния фотометрируют при длине волны 630— 660 нм против тимолово-вероналового буфера в кювете с толщиной слоя 1 см. Реакцию проводят при t° 25°. Степень помутнения оценивается по калибровочной кривой, которую строят по результатам определения оптической плотности разведений стандартной суспензии сульфата бария.

Полагают, что тимоловая проба положительна при относительном уменьшении содержания альбуминов в сыворотке крови и увеличении содержания β- и γ-глобулинов и связанных с β-глобулинами липидов (липопротеинов). При заболеваниях, не сопровождающихся повреждением паренхимы печени, положительная тимоловая проба встречается редко. Особенно большое значение эта проба приобретает при вирусном гепатите, т.к. она становится положительной до развития желтухи. Тимоловая проба положительна также при безжелтушных гепатитах, после перенесенного гепатита, при циррозе печени.

Сулемовая проба (сулемово-осадочная проба) относится к группе реакций Таката. Реакция Таката, или реакция Таката — Ара (фуксин-сулемовая проба), предложена в 1925 г. японскими патологами Таката (М. Takata) и Ара (К. Ага) и основана на определении степени помутнения, развивающегося при взаимодействии раствора сулемы (двуххлористой ртути HgCL₂) и карбоната натрия с сывороткой крови.

Проведение сулемовой пробы состоит в следующем: 0,5 мл негемолизированной свежей сыворотки разводят 1 мл физиологического раствора и титруют 0,1% раствором сулемы пока не разовьется стойкое помутнение такой степени, что через вертикальный слой помутневшей жидкости нельзя прочесть газетный текст. Результаты сулемовой пробы выражают в миллилитрах раствора сулемы, пошедшего на титрование.

В норме на титрование идет 1,6—2,2 мл раствора сулемы. Меньшие количества указывают на относительное повышение содержания глобулинов и уменьшение величины альбумин-глобулинового коэффициента. Сулемовая проба положительна (количество раствора сулемы, пошедшее на титрование, выше нормы) при циррозе печени, острых токсических ее поражениях, силикозе, силикотуберкулезе.

Проба Вельтманна (коагуляционная проба, австрийского врача Вельтманна, реакция Вельтманна, коагуляционная лента Вельтманна) предложена в 1930 г. Вельтманном (О. Weltmann) и основана на появлении помутнения при добавлении к сыворотке крови раствора хлористого кальция. В 12 последовательно пронумерованных пробирок («лента») добавляют по 0,1 мл сыворотки крови и по 5 мл раствора хлорида кальция соответствующих разведений (в процентах): 0,1; 0,09; 0,08; 0,07; 0,06; 0,05; 0,045; 0,04; 0,35; 0,03; 0,02 и 0,01. Содержимое пробирок перемешивают и штатив с ними погружают в кипящую водяную баню на 15 мин. Вынув штатив, отмечают результат. Жидкость в пробирках может быть прозрачна, мутна или же содержать хлопьевидный осадок, причем разница между мутью и выпадением хлопьев очень отчетлива. Отмечают пробирки, в которых выпали хлопья. В норме хлопья выпадают в 6—7-й пробирке (т.е. длина «ленты» по Вельтманну 6—7 пробирок). Укорочение ленты Вельтманн называл сдвигом влево, удлинение сдвигом вправо. При резком сдвиге влево может не быть свертывания ни в одной пробирке.

Позже был предложен ряд модификаций пробы Вельтманна, которые в основном сводились к изменению количества испытуемой сыворотки крови, хлористого кальция и времени кипячения. В СССР в качестве унифицированного метода принята модификация пробы Вельтманна, предложенная Тейфлем (A. Teufl).

Проба Вельтманна в модификации Тейфля состоит в следующем: к 0,1 мл негемолизированной свежей сыворотки крови прибавляют 4,9 мл воды, перемешивают и добавляют 0,1 мл (2 капли) 0,5% раствора хлорида кальция. Пробирку встряхивают и нагревают над пламенем до однократного вскипания смеси. Остужают и в проходящем свете определяют, нет ли помутнения. Если помутнения нет, в эту же пробирку добавляют еще 0,1 мл того раствора и вновь кипятят и т.д. Результаты оценивают по общему количеству 0,5% раствора хлорида кальция, добавленного к пробе до появления хлопьевидного осадка.

В норме помутнение наступает при добавлении 0,4—0,5 мл хлорида кальция. Если коагуляция происходит при прибавлении меньшего количества хлорида кальция (сдвиг вправо, по Вельтманну), это может свидетельствовать о поражении паренхимы печени — вирусном гепатите, циррозе, острой желтой дистрофии печени, малярии, а также о состоянии после массивного переливания крови или аутогемотерапии. Если коагуляция происходит при добавлении бо́льшего количества хлорида кальция (5—1-я пробирка, или сдвиг влево по Вельтманну), то у больного можно подозревать экссудативную фазу ревматизма или активный процесс при туберкулезе легких.

Библиогр.: Лабораторные методы исследования в клинике, под ред. В.В. Меньшикова, с. 179, М., 1987; Казаков А.И. Функциональные пробы в диагностике заболеваний печени, с. 41, М., 1968.