- Фаготипирование
- Фаготипированиеспособ определения принадлежности выделенной и идентифицированной до вида к-ры к тому или иному фаговару (см.). Используют 2 подхода. Сущность первого состоит в установлении св-в, полученных из лизогенной к-ры фагов (литического спектра, антигенной специфичности и др.). Сущность второго, более распространенного, подхода базируется на выявлении спектра чувствительности выделенной к-ры к набору стандартных типовых фагов. Если фаговар к-ры соответствует типовому фагу, наступает лизис к-ры, проявляющийся в отсутствии роста, в то время как на месте нанесения др. фагов наблюдается сплошной рост микробов. Для Ф. необходимы молодая (4 - 6-часовая) к-ра иссл. штамма, идентифицированного до вида или подвида; набор стандартных типовых фагов в критических тест-разведениях (в максимальном разведении фага, вызывающем сплошной лизис гомологичной к-ры); чашки Петри со стандартной свежеприготовленной и хорошо высушенной средой. К-ру засевают сплошным газоном на чашку с питательной средой, дают ей впитаться в агар и на поверхность посева пастеровской пипеткой, штампом-репликатором или калиброванной петлей наносят типовые фаги. На второй день учитывают спектр чувствительности к-ры к фагам и сопоставляют со схемой Ф. Результаты используют для эпидемиологического анализа. Ф. применяют для типирования S. typhi.S. sonnei,S. aureus.V. cholerae и др. Фагоцитарные реакции - пробирочные иммунные реакции, основанные на взаимодействии фагоцитов с микроорганизмами при участии или без участия С и Ат. Используют для выяснения активности фагоцитарной реакции в целом и функционирования отдельных этапов Ф.р. (хемотаксиса, опсонизации, прикрепления, захвата, умерщвления, переваривания). Для оценки фагоцитарной активности обычно применяют: 1) фагоцитарный индекс Гамбургера (ФИ) - процент фагоцитов, принимающих участие в фагоцитозе; 2) фагоцитарное число Райта (ФЧ) - среднее число захваченных одним фагоцитом частиц; 3) показатель фагоцитарной способности крови индивида (ПФС) - произведения ФИ и ФЧ на число лейкоцитов или моноцитов в 1 мкм крови; 4) показатель завершенности фагоцитоза; 5) др. показатели, напр. НСТ-тест. Для постановки Ф.р. берут очищенную суспензию лейкоцитов людей или цельную кровь. В качестве антикоагулянта в том и др. случае предпочтительнее использовать гепарин. В качестве объекта фагоцитоза в зависимости от задач исследования применяют гетерологичные эритроциты, отмытые от среды взвеси живых или убитых нагреванием бактерий, кандид, дрожжей, частицы латекса, угля, крахмала. Лучше брать живые к-ры стандартных штаммов золотистого и белого стафилококка и кишечной палочки, поскольку они позволяют выявить важнейший показатель фагоцитоза- его завершенность. Для опыта необходимы отмытые от среды суточные агаровые к-ры плотностью 0,2 - 2 млрд м.т./мл при исследовании фагоцитарной активности полинуклеаров и 10 млн м.т./мл - при исследовании мононуклеаров. В качестве разбавителя желательно применять р-р Хенкса, рН 6,5 - 7,2, с 10% с-ки крови здорового человека, не содержащей Ат к иссл. микробу. Для опсонофагоцитарной реакции необходима иммунная с-ка. Соотношение лейкоцитов и микробов и время контакта определяют в зависимости от задач в предварительных опытах. Соотношение рекомендуют от 1:1 до 1:100, экспозицию - от 5 мин до 3 ч. Для постановки Ф.р. с цельной кровью взятую из пальца в стерильные пробирки с гепарином кровь разводят р-ром Хенкса (1:20), центрифугируют 5 мин при 800 g, над осадок сливают, осадок р-ром Хенкса разбавляют до прежнего объема. В нескольких пробирках готовят смеси из 0,5 мл суспензии лейкоцитов и 0,5 мл отмытых от среды суспензии микроорганизмов в р-ре Хенкса плотностью 100 млн м.т./мл. Смесь инкубируют при 37°С и через 15, 30, 45 мин одну из пробирок центрифугируют 5 мин при 800 g, из осадка готовят мазки, фиксируют их смесью Никифорова и окрашивают водным раствором метиленового синего или по Романовскому -Гимзе. Подсчитывают ФИ и ФЧ, а исходя из этих данных и количества лейкоцитов в 1 мкл - ПФС. Важно найти также скорость Ф. р. Методика определения фагоцитарной активности с отмытой взвесью лейкоцитов отличается от описанной только первым этапом, в к-ром готовят взвесь очищенных лейкоцитов в р-ре Хенкса с гепарином плотностью 2 -10 млн/мл. Предложено много др. методов постановки Ф.р.(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)
.
