Посевы бактериологические

Посевы бактериологические

нанесение (внесение) петлей, пипеткой или др. инструментом содержащего бактерии материала на (в) питательные среды в целях выделения чистой к-ры, ее накопления, хранения, а также определения количества и многообразных св-в (см. Бактериологический метод). П. б. должны проводиться таким образом, чтобы достигнуть поставленной цели (напр., получения изолированных колоний) и в то же время предупредить контаминацию посевного материала и питательных сред микробами окружающей среды, а также заражение людей и контаминацию окружающих объектов микробами, находящимися в посевном материале. П.б. проводят в спецодежде, в специальных боксах и лабораториях, содержащих минимальное число микробов, около пламени горелки, стерильными инструментами, в стерильные среды и при строгом соблюдении др. условий асептики. В зависимости от целей и посевного материала П.б. делают на плотные или жидкие среды, чашки Петри, пробирки, колбы, матрацы, ферментеры и др. Техника посева на чашки Петри бактериол. петлей: петлю прокаливают на пламени, охлаждают, берут каплю посевного материала, левой рукой приоткрывают один край чашки, вносят внутрь ее петлю, около одного из краев круговыми движениями петли делают площадку и засевают материал на всю поверхность среды параллельными штрихами с интервалом 4 - 5 мм. Если в материале находится большое количество микробов, то материал аналогичным образом засевают на половине чашки, затем петлю прожигают, чашку поворачивают на 90° и на оставшейся части среды проводят перпендикулярные штрихи петлей, захватывая часть предыдущего посева. Еще один вариант посева петлей заключается в том, что чашку со средой мысленно делят на 4 - 5 радиальных секторов и одной и той же петлей поочередно делают посевы на всех секторах. Техника посева шпателем: берут 3 чашки с плотной средой. На середину первой петлей или пипеткой вносят каплю посевного материала и круговыми движениями шпателя или чашки производят сплошной посев Этим же шпателем, не стерилизуя его, распределяют материал по второй и третьей чашкам. Методика позволяет получить изолированные колонии, но менее экономична, чем остальные. Техника посева тампоном: первоначально тампоном, поворачивая его разными сторонами, проводят на чашке со средой диагональную дорожку шириной 1-2 см, затем штрихами петли через дорожку засевают среду по обе ее стороны. Во втором варианте один из радиальных секторов чашки засевают тампоном, а затем поочередно остальные секторы - петлей с заходом каждый раз на уже обработанную тампоном поверхность. Техника посева штампом-репликатором: в лунки основания штампа-репликатора пипеткой наливают по 0,1 мл бульонных или смывов агаровых к-р. Крышку штампа накладывают на основание таким образом, чтобы штыри окунулись в лунки с к-рой, после чего делают отпечатки (реплики) на поверхности плотной среды одной или нескольких чашек. При такой методике на одной чашке может быть испытано на чувствительность к антибиотикам, ферментацию Сахаров или др. св-ва одновременно 25 - 50 к-р. На отпечатках вырастают однородные по величине и форме участки роста. Техника посева бляшкой: при определении некоторых св-в иссл. к-р бактерий (гемолиз, токсигенность, лецитиназная активность и др.) на плотных средах производят плотный посев на ограниченном участке среды в виде прямоугольника, овала, круга размерами 0,5 - 0,8x1 - 1,5 см. Между бляшками следует выдерживать расстояние в несколько см. (в зависимости от теста). Техника посева сплошным газоном: стерильной пипеткой в чашку со средой вносят 1 мл 1 - 2-миллиардной к-ры, осторожными круговыми движениями чашки покрывают к-рой всю без исключения поверхность среды, чашку слегка наклоняют и пипеткой отсасывают остатки к-ры. Полученный сплошной газон подсушивают и используют для тех или иных целей, напр. для нанесения типовых фагов. Техника посева в пробирки со скошенной средой: прямой посев иссл. материала на скошенную среду делают редко, напр., при выделении микобактерий. Чаще на скошенные среды переносят к-ру из др. пробирки или с колоний на чашках. Для этого обе пробирки держат в левой руке (пробирка с засеянной средой находится ближе к туловищу лаборанта) в наклонном положении между большим и указательным пальцами так, чтобы поверхность среды можно было наблюдать. Петля - в правой руке. Пробки обеих пробирок вынимают, зажимая их между мизинцем и ладонью (гипотенором). В таком положении они остаются до конца посева. Края пробирок обжигают, петлю прокаливают, охлаждают о стенку пробирки, слегка прикасаются ею к росту к-ры на поверхности питательной среды, переносят петлю, не прикасаясь к стенкам, во вторую пробирку и делают сплошной штриховой посев. Петлю прокаливают, ставят в штатив, края пробирок прокаливают и закрывают пробками. Техника посева в конденсационную воду: выбирают свежескошенную среду, содержащую на дне каплю конденсационной жидкости. Иссл. к-ру забирают петлей, открывают пробку, обжигают края пробирки и петлю, осторожно, не касаясь среды и стенок, вносят в конденсационную воду. У выражение подвижных к-р рост бактерий с конденсационной воды распространяется на влажную поверхность косяка. С верхней части роста бактерий производят пересев в конденсационную воду второй пробирки и т.д. Методика позволяет получить чистую к-ру подвижных бактерий, напр., протея (способ Шукевича), возбудителя столбняка (способ Файлдса). Техника посева в верхнюю часть скошенной среды: материал или к-ру с соблюдением всех указанных выше технических приемов наносят в виде бляшки на верхнюю часть свежескошенной среды. Пробирки помещают в термостат в вертикальном положении и наблюдают за сползанием к-ры вниз по поверхности скошенной части, к-рое характерно для слизистых штаммов. Техника посева в толщу плотной среды:к 15-20 мл расплавленной и охлажденной до 48°С плотной питательной среды Добавляют 1 мл иссл. материала или иссл. к-ры (одно или несколько разведении в зависимости от цели). К-ру и среду смешивают энергичными круговыми движениями флакона, выливают в стерильную чашку, распределяют ровным слоем по всей поверхности, дают затвердеть на ровной горизонтальной поверхности и помещают в термостат. Колонии вырастают в толще и на поверхности среды и, если среда прозрачная, могут быть легко подсчитаны. Таким же образом посев может быть произведен в толщу столбика плотной среды в Пробирке. Техника посева уколом в столбик плотной или полужидкой среды: используют высокий столбик плотной среды, напр., при культивировании анаэробов; столбик полужидкой питательной среды, напр., при изучении сахаролитических св-в на полужидких средах; полускошенные плотные среды, напр., при накоплении и предварительной идентификации выделенной к-ры в трехсахарном агаре. Во всех случаях бактер. петлей или нтлой с посевным материалом делают прокол среды с поверхности до дна. Пробирку реко-м ендуют держать дном вверх, чтобы не наступала контаминация среды воздушной микрофлорой. Посев в жидкие среды в пробирках или флаконах производят обычно стерильным и пастеровскими или градуированными пипетками. В пробирки материал можно засевать и бактер. петлей.

(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)