Лизоцима определения.

Лизоцима определения.

методы определения Л. основаны на измерении ФЭК-М или СФМ изменений оптической плотности стандартной живой суспензии М. lysodeikticus (штамм 2665) или изготовленного из него ацетонового порошка под влиянием Л., содержащегося в иссл. биол. жидкости. В опытную пробирку наливают 0,4 мл 1/15 М фосфатного буфера (рН 6,2), 0,1 мл иссл. с-ки и 2 мл взвеси (на таком же фосфатном буфере) суточной агаровой к-ры микрококка плотностью 0,66 (по левому барабану ФЭК-М). Смесь инкубируют при 37 °С в течение 30 мин и плотность ее замеряют на ФЭК-М по правому барабану с зеленым светофильтром. Показатель барабана сравнивают с калибровочной кривой. Активность Л. выражают в мкг/мл (методика О. В. Бухарина, 1971). Методика, разработанная Л.П. Титовым (1978), пригодна для определения содержания Л. в любых биол. жидкостях. Однако для регистрации результатов необходим спектрофотометр (СФМ) с термостатирующей камерой и записывающим устройством. В кювету СФМ 10x10 мм объемом 3 мл последовательно вносят 1,5 мл 0,05% взвеси ацетонового порошка микрококка, приготовленного на 1/15 М фосфатном буфере, 0,5 мл 0,3 М р-ра натрия хлорида и 0,5 мл цельной либо разведенной с-ки или др. иссл. жидкости. Содержимое кюветы перемешивают тефлоновой палочкой, ставят в термостатирующее устройство подготовленного к работе СФМ и на 90-120 с включают его записывающее устройство. Находят тангенс угла наклона кинетической кривой и по калибровочному графику устанавливают активность Л. в мкг/мл. Поскольку активность Л. в разных субстратах неодинакова, в предварительном опыте следует подобрать соотношения между концентрацией субстрата и фермента. У здоровых людей среднее значение активности Л. с-ки крови по этому методу равно 10,66± 00,34, носовой слизи - 76,6 7± 04,81 мкг/мл. Для Л.о. предложен также метод диффузии в агаре.

(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)